杭州浩克生物
名稱：熒光原位雜交(FISH雙標(biāo))
標(biāo)本要求：石蠟，冰切，細(xì)胞爬片
產(chǎn)品周期：5個工作日。
項目介紹：
1. 原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進行雜交，從而對特定核酸順序進行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進行。
2. 所需器材：
脫水機G-JT12s，包埋機G-L5/p5,病理切片機RM2016，凍臺G-P1，烤箱GFL-70/230,組織攤片機G-KDP，載玻片及蓋玻片，正置熒光顯微鏡，成像系統(tǒng)，恒溫箱，高壓滅菌鍋，移液槍，鐘擺搖床。
3. 主要試劑：DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。DAPI?？篃晒獯銣绶馄瑒?。雜交液。
實驗步驟：
細(xì)胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實驗步驟
1、細(xì)胞爬片固定：細(xì)胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
2、消化：基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
3、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h。
4、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針1雜交液，37度雜交過夜。
5、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌
6、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針2雜交液，37度雜交過夜。
7、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
8、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光。)
細(xì)胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實驗結(jié)果判讀
DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍色，陽性表達為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的熒光。FAM(488)為綠光，cy3為紅光。mRNA原位雜交顯示結(jié)果理論為胞漿陽性，少數(shù)核陽性屬正常。micRNA與lncRNA不同指標(biāo)表達定位不同。根據(jù)表達量不同熒光亮度有強弱。
| Tunel（白光）檢測 | 200元/張 |
| Tunel（熒光）檢測 | 200元/張 |
| IF Tunel 雙染 | 250元/張 |
| Tunel( 芯片） | 550元/張 |
| 原位雜交（DAB 顯色） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH 單標(biāo)） | 240元/張 |
| 原位雜交（FISH、IF 雙染） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 雙標(biāo)） | 300元/張 |
| 原位雜交（FISH 三標(biāo)） | 350元/張 |
| 原位雜交（芯片） | 500 元起 |
| 探針設(shè)計合成（一端標(biāo)記、BIO） | 600元/條 |
| 探針設(shè)計合成（一端標(biāo)記、DIG） | 1000 元 / 條 |
| 探針設(shè)計合成（一端標(biāo)記、FAM） | 1100 元 / 條 |
| 探針設(shè)計合成（一端標(biāo)記、Cy3） | 1900 元 / 條 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標(biāo)記、BIO） | 1200 元 / 條 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標(biāo)記、DIG） | 1690 元 / 條 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標(biāo)記、FAM） | 1400 元 / 條 |
| 探針設(shè)計合成（兩端標(biāo)記、Cy3） | 2500 元 / 條 |
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