熒光原位雜交(FISH、IF 雙染)
Tunel(白光)檢測 | 200元/張 |
Tunel(熒光)檢測 | 200元/張 |
IF Tunel 雙染 | 250元/張 |
Tunel( 芯片) | 550元/張 |
原位雜交(DAB 顯色) | 240元/張 |
原位雜交(FISH 單標(biāo)) | 240元/張 |
原位雜交(FISH、IF 雙染) | 300元/張 |
原位雜交(FISH 雙標(biāo)) | 300元/張 |
原位雜交(FISH 三標(biāo)) | 350元/張 |
原位雜交(芯片) | 500元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(一端標(biāo)記、BIO) | 600元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(一端標(biāo)記、DIG) | 1000元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(一端標(biāo)記、FAM) | 1100元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(一端標(biāo)記、Cy3) | 1900元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(兩端標(biāo)記、BIO) | 1200元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(兩端標(biāo)記、DIG) | 1960元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(兩端標(biāo)記、FAM) | 1400元/張 |
探針設(shè)計(jì)合成(兩端標(biāo)記、Cy3) | 2500元/張 |
原位雜交與免疫熒光原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。免疫熒光就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標(biāo)記在抗體或抗原上,與其相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后,在熒光顯微鏡下呈現(xiàn)一種特異性熒光反應(yīng)。
應(yīng)用
通過原位雜交及免疫熒光雙染,可以在組織細(xì)胞中對(duì)核酸分子和蛋白指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行共定位、以及定性分析,可以用來從共定位角度提示核酸和蛋白存在相互作用。
實(shí)驗(yàn)流程
石蠟切片熒光探針原位雜交與免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟
1. 組織固定、脫水、切片、石蠟切片脫蠟至水;
2. 消化:切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,滴加蛋白酶K消化;
3. 預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。
4. 雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針 雜交液濃度 ,恒溫箱 度雜交過夜。
5. 雜交后洗滌:SSC洗滌;
6. 孵育一抗、二抗:滴加一抗,4℃過夜,后PBS洗3×5min;滴加相應(yīng)二抗,室溫孵育50min,PBS洗3×5min;
7. DAPI復(fù)染核:切片滴加DAPI染液,避光孵育8min;
8. 鏡檢拍照;
樣品保存運(yùn)輸
組織冰凍切片
組織切取需要部位,厚度在2mm 左右, PBS漂洗,干冰運(yùn)輸或立即置于固定液中。組織固定有原位雜交固定液
(動(dòng)物)、原位雜交固定液(植物)、原位雜交固定液(較嫩植物),室溫固定12小時(shí)(根據(jù)組織大小)以上,植物組織固定時(shí)需常溫抽真空30min,再用純水或PBS清洗兩次后, 放入15%蔗糖溶液中,4℃脫水8小后,換30%蔗糖溶液4℃過夜。冰切時(shí)佩戴手套。冰凍切片放-20℃或-80℃保存?zhèn)溆谩?br> 組織石蠟切片
組織切取需要部位,厚度在2mm 左右, PBS漂洗后立即固定。動(dòng)物組織用原位雜交固定液(動(dòng)物),植物組織用原位雜交固定液(植物)或原位雜交固定液(較嫩植物),植物組織固定時(shí)需常溫抽真空30min,固定12h以上。固定完成后脫水、包埋、切片。梯度酒精配制需用DEPC水。石蠟常規(guī)保存?zhèn)溆谩?br> 標(biāo)本運(yùn)輸
冰凍切片:標(biāo)本放原位雜交固定液中,常溫運(yùn)輸;冰凍切片-20℃運(yùn)輸;新鮮組織干冰運(yùn)輸。交接單隨樣本一起,單獨(dú)封裝。
石蠟切片:標(biāo)本放原位雜交固定液中,常溫運(yùn)輸;石蠟切片常溫運(yùn)輸。交接單隨樣本一起,單獨(dú)封裝。
細(xì)胞爬片:細(xì)胞爬片加原位雜交固定液后密封4℃運(yùn)輸。交接單隨樣本一起,單獨(dú)封裝。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1. mRNA為檢測對(duì)象時(shí),需嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境經(jīng)無RNA酶處理;
2. FISH切片保存時(shí)間較短,應(yīng)盡快取圖;
3. 不同的抗體與原位雜交進(jìn)行雙標(biāo)時(shí),可能會(huì)有影響,必要時(shí)進(jìn)行一定的實(shí)驗(yàn)步驟調(diào)整,以避免相互之間的影響;
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