標(biāo)本要求：組織、細(xì)胞、血液、其它

　　實(shí)驗(yàn)周期：3周~4周

　　收費(fèi)價(jià)格：每個(gè)樣品每個(gè)基因800元，每個(gè)基因1對(duì)引物費(fèi)70元

　　產(chǎn)品介紹：亞硫酸氫鹽處理后測(cè)序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法是檢測(cè)基因甲基化的經(jīng)典方法,其原理為:用亞硫酸氨鈉修飾處理基因組DNA,所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶則不變。隨后設(shè)計(jì)BSP引物進(jìn)行PCR,在擴(kuò)增過(guò)程中尿密啶全部陣?；癁樾叵汆奏?最后,將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進(jìn)行測(cè)序,并且與未經(jīng)處理的序列比較,判斷是否CpG位點(diǎn)發(fā)生甲基化,這種方法稱為BSP-克隆測(cè)序法。此方法是精確度很高,能明確目的片段中每一個(gè)CpG位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)。一般會(huì)選取10個(gè)克隆子測(cè)序。

　　實(shí)驗(yàn)流程

　　(1) 樣本接收:組織、細(xì)胞、血液、其它

　　(2) 實(shí)驗(yàn)步驟: DNA提取-亞硫酸氫鹽處理-純化DNA-PCR擴(kuò)增-TA克隆-測(cè)序

　　(3) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果:完整項(xiàng)目報(bào)告(材料、試劑、儀器、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果)

　　注意事項(xiàng)：

　　1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或-80度保存,組織不少于100mg,低溫運(yùn)輸

　　2、培養(yǎng)細(xì)胞:通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2×10⁶個(gè)細(xì)胞于EP管,收集細(xì)胞沉淀后,液氮速凍,低溫保存或運(yùn)輸(-80℃,避免反復(fù)凍融);

　　3、血液標(biāo)本:以抗凝管保存血樣(4℃保存3~5天,如果要長(zhǎng)時(shí)間保存需放在-80℃);

　　4、DNA樣品:純度OD260/280比值為1.8-2.0,濃度≥50ng/ul,體積≥50ul。

　　5、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本

　　　a組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸;

　　　b.細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、培養(yǎng)液不漏出);

　　6、提供詳細(xì)的基因信息, BSP方法要求待測(cè)序列在350bp左右。我們會(huì)根據(jù)客戶的基因序列信息設(shè)計(jì)引物,并在方案實(shí)驗(yàn)過(guò)程中隨時(shí)與客戶溝通。