| 品牌 | 商品編碼 | 商品名稱 | 規(guī)格 | 價格 |
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| HaoKebio | HKI0022 | Edu染色試劑盒（紅，AF555) | 100T | ￥700 |
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【產品簡介】
EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine)，中文名為 5-乙炔基-2′ -脫氧尿苷，是一種胸腺嘧啶 核苷類似物，在細胞增殖時能夠替代胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine) 插入正在復制的 DNA 分子中， EdU 上的乙炔基能與熒光標記的小分子疊氮化物探針(如Azide Alexa Fluor 488 等) 通過一價銅離子催化發(fā)生共價反應，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應非常迅速，被稱作點擊反應 (Click reaction)，從而可以進行高效快速的檢測細胞增殖，特別是可以有效地檢測處于 S 期 的細胞百分數(shù)。
本試劑盒中熒光探針為紅色熒光，最大激發(fā)波長為 557nm，最大發(fā)射波長為 570 nm，處于 增殖的細胞被標記后，細胞核會顯示出明亮的紅色熒光，通過配套常規(guī)細胞核染料共同標記細 胞核，可用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等儀器直接觀察細胞增殖情況；也可以使用流式細 胞儀檢測體外培養(yǎng)細胞群熒光強度，根據(jù)熒光強度，來判斷細胞周期中 S 期的 DNA 復制活性。
【儲存與運輸】
冰袋運輸，-20?C 儲存，可穩(wěn)定儲存一年【使用方法】
動物 EdU 注射
對于小鼠，可以按照 10-200mg/kg 的用量，把 EdU 用 PBS 配制成一定濃度，腹腔注射、特定組 織或器官局部注射或者加入飲用水中。具體用量跟所用動物的種類、體重和使用方式有關，可 以參考相關文獻，因此初次使用時建議對 EdU 的使用濃度進行一定的摸索，或者直接使 50mg/kg 的濃度進行測試。
注射方式:依據(jù)客戶實驗而定，如腹腔注射，皮下注射，肌肉注射，尾靜脈注射等，其中以腹腔 注射為多。6 小時后或根據(jù)特定實驗確定適當?shù)臅r間后，快速處死小鼠，取出所需組織，按照 常規(guī)步驟制作冰凍切片或石蠟切片。EdU 標記的時候也可參考相關文獻自行調整。建議任何實 驗均可取小腸組織檢測細胞增殖情況，小腸上皮組織細胞增殖快，成年小鼠 EdU 注射 6 小時后 即可檢測到陽性信息，可用作陽性對照進行預實驗。
切片處理
切片前處理：組織器官最好進行清洗，以去除血液、組織中殘留的EdU，降低背景。
切片厚度：3-10μm 為宜，切片過厚可能會影響切片背景。
切片后處理：
石蠟切片脫蠟：二甲苯脫蠟 2 次，15 分鐘/次，乙醇梯度 (100%，95%，85%，75%) 洗脫各一次， 5 分鐘/次，去離子水洗脫 1 次。
冰凍切片處理：室溫放置 30 分鐘后，固定 10 分鐘，PBS 清洗 3 次，每次 5 分鐘。
Edu 反應
按照 PB:CU:紅色色原：AC=860:40:1:100 的比列配制 EdU 反應液。 (反應液現(xiàn)配現(xiàn)用)
每片組織滴加 50-100 μl 的 EdU 染色反應液，室溫避光孵育 15 分鐘，棄染色反應液，PBS 沖洗 3 次，每次 5 分鐘。
其他染色
客戶可以根據(jù)需要進行細胞表面或者細胞內抗原染色。
DAPI 染色
每片組織加入 50-100ul DAPI 染色液，染色 15 分鐘，PBS 洗脫三次，每次 5 分鐘。
圖像拍照
染色完成后建議立刻觀察，使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡采集圖像，本試劑盒熒光染料 AF555 對應的光譜特性為 Ex/Em：557 nm/570 nm (紅色) ；DAPI 染色液對應的光譜特性為 Ex/Em：
358 nm/461 nm (藍色) 。
【注意事項】
1. 對于體外培養(yǎng)細胞，具體 EdU 使用濃度、孵育時間隨樣品以及研究目的的不同，可進行 適當調整。
2. 部分組織細胞增殖速度緩慢，為了排除造模效果不佳等因素，建議選增殖快的組織樣品作 為參照樣本 (如腸道組織)。
3. 如果背景顏色過深，可能是實驗中洗滌不充分、組織樣品固定時間過長、固定液殘余導致。
4. 催化劑 AC 顏色發(fā)生輕微變化，點擊反應催化體系依舊能夠正常進行，如呈現(xiàn)棕色，表明 該組分已失效，請棄用。
5. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。
4. 催化劑 AC 顏色發(fā)生輕微變化，點擊反應催化體系依舊能夠正常進行，如呈現(xiàn)棕色，表明 該組分已失效，請棄用。
5. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。
杭州浩克生物
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