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Edu染色試劑盒(綠,AF488)

Edu染色試劑盒(綠,AF488)

  • 價(jià)格¥700
  • 規(guī)格100T
  • 貨號(hào)HKI0021
  • 單位個(gè)
  • 品牌HaoKebio

產(chǎn)品介紹
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HaoKebioHKI0021Edu染色試劑盒(綠,AF488)100T¥700


【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
EdU(5-ethynyl-2′ -deoxyuridine),中文名為 5-乙炔基-2′ -脫氧尿苷,是一種胸腺嘧啶 核苷類(lèi)似物,在細(xì)胞增殖時(shí)能夠替代胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷,thymidine) 插入正在復(fù)制的 DNA 分子中,  EdU 上的乙炔基能與熒光標(biāo)記的小分子疊氮化物探針(如Azide Alexa Fluor 488 等) 通過(guò)一價(jià)銅離子催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng),形成穩(wěn)定的三唑環(huán),該反應(yīng)非常迅速,被稱作點(diǎn)擊反應(yīng) (Click reaction),從而可以進(jìn)行高效快速的檢測(cè)細(xì)胞增殖,特別是可以有效地檢測(cè)處于 S 期 的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。
本試劑盒中熒光探針為綠色熒光,最大激發(fā)波長(zhǎng)為 491 nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為 516 nm,處 于增殖的細(xì)胞被標(biāo)記后,細(xì)胞核會(huì)顯示出明亮的綠色熒光,通過(guò)配套常規(guī)細(xì)胞核染料共同標(biāo)記 細(xì)胞核,可用熒光顯微鏡、激光共聚焦顯微鏡等儀器直接觀察細(xì)胞增殖情況;也可以使用流式 細(xì)胞儀檢測(cè)體外培養(yǎng)細(xì)胞群熒光強(qiáng)度,根據(jù)熒光強(qiáng)度,來(lái)判斷細(xì)胞周期中 S 期的 DNA 復(fù)制活性。

【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】
冰袋運(yùn)輸,-20?C 儲(chǔ)存,可穩(wěn)定儲(chǔ)存一年

【使用方法】

動(dòng)物 EdU 注射

對(duì)于小鼠,可以按照 10-200mg/kg 的用量,把 EdU 用 PBS 配制成一定濃度,腹腔注射、特定組 織或器官局部注射或者加入飲用水中。具體用量跟所用動(dòng)物的種類(lèi)、體重和使用方式有關(guān),可 以參考相關(guān)文獻(xiàn),因此初次使用時(shí)建議對(duì) EdU 的使用濃度進(jìn)行一定的摸索,或者直接使 50mg/kg 的濃度進(jìn)行測(cè)試。

注射方式:依據(jù)客戶實(shí)驗(yàn)而定,如腹腔注射,皮下注射,肌肉注射,尾靜脈注射等,其中以腹腔 注射為多。6 小時(shí)后或根據(jù)特定實(shí)驗(yàn)確定適當(dāng)?shù)臅r(shí)間后,快速處死小鼠,取出所需組織,按照 常規(guī)步驟制作冰凍切片或石蠟切片。EdU 標(biāo)記的時(shí)候也可參考相關(guān)文獻(xiàn)自行調(diào)整。建議任何實(shí) 驗(yàn)均可取小腸組織檢測(cè)細(xì)胞增殖情況,小腸上皮組織細(xì)胞增殖快,成年小鼠 EdU 注射 6 小時(shí)后 即可檢測(cè)到陽(yáng)性信息,可用作陽(yáng)性對(duì)照進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)。

切片處理

切片前處理:組織器官最好進(jìn)行清洗,以去除血液、組織中殘留的EdU,降低背景。

切片厚度:3-10μm 為宜,切片過(guò)厚可能會(huì)影響切片背景。

切片后處理:

石蠟切片脫蠟:二甲苯脫蠟 2 次,15 分鐘/次,乙醇梯度 (100%,95%,85%,75%) 洗脫各一次, 5 分鐘/次,去離子水洗脫 1 次。

冰凍切片處理:室溫放置 30 分鐘后,固定 10 分鐘,PBS 清洗 3 次,每次 5 分鐘。

Edu 反應(yīng)

按照 PB:CU:綠色色原:AC=860:40:1:100 的比列配制 EdU 反應(yīng)液。  (反應(yīng)液現(xiàn)配現(xiàn)用)

每片組織滴加 50-100 μl 的 EdU 染色反應(yīng)液,室溫避光孵育 15 分鐘,棄染色反應(yīng)液,PBS 沖洗 3 次,每次 5 分鐘。

其他染色

客戶可以根據(jù)需要進(jìn)行細(xì)胞表面或者細(xì)胞內(nèi)抗原染色。

DAPI 染色

每片組織加入 50-100ul DAPI 染色液,染色 15 分鐘,PBS 洗脫三次,每次 5 分鐘。

圖像拍照

染色完成后建議立刻觀察,使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡采集圖像,本試劑盒熒光染料 AF488 對(duì)應(yīng)的光譜特性為 Ex/Em:491 nm/516 nm (綠色) ;DAPI 染色液對(duì)應(yīng)的光譜特性為 Ex/Em:

358 nm/461 nm (藍(lán)色) 。

【注意事項(xiàng)】

1. 對(duì)于體外培養(yǎng)細(xì)胞,具體 EdU 使用濃度、孵育時(shí)間隨樣品以及研究目的的不同,可進(jìn)行 適當(dāng)調(diào)整。

2. 部分組織細(xì)胞增殖速度緩慢,為了排除造模效果不佳等因素,建議選增殖快的組織樣品作 為參照樣本 (如腸道組織)。

3. 如果背景顏色過(guò)深,可能是實(shí)驗(yàn)中洗滌不充分、組織樣品固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、固定液殘余導(dǎo)致。

4. 催化劑 AC 顏色發(fā)生輕微變化,點(diǎn)擊反應(yīng)催化體系依舊能夠正常進(jìn)行,如呈現(xiàn)棕色,表明 該組分已失效,請(qǐng)棄用。

5. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,佩戴一次性手套。

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