免疫組化（芯片）

【產(chǎn)品信息】

• 實(shí)驗(yàn)原理

服務(wù)介紹：

　　組織芯片免疫組化染色,是將多種組織以規(guī)則的微陣列方式排列于同一載體上，同時進(jìn)行相同指標(biāo)的免疫組化檢測。組織芯片具有體積小, 標(biāo)本信息含量大 , 一次性實(shí)驗(yàn)即可獲大量結(jié)果。實(shí)驗(yàn)條件更易控制一致，減少批間批內(nèi)誤差，結(jié)果更準(zhǔn)確。節(jié)省試劑，節(jié)省人力物力等優(yōu)點(diǎn)。

• 實(shí)驗(yàn)器材及試劑

1.主要實(shí)驗(yàn)器材

2.主要實(shí)驗(yàn)試劑

• 實(shí)驗(yàn)步驟
• 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -無水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min，自來水洗2min。
• 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿xxxx抗原修復(fù)緩沖液（PH ）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，中火8min至沸，停火8min保溫再轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
• 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
• 畫圈：用組化專用的組化筆沿著組織外圍輪廓畫一個與組織間隔3-4毫米的小圈，然后加入足量的PBS保證后續(xù)依次加入的封閉血清，一抗，二抗，以及顯色劑能完全覆蓋組織，而不沿著玻片流走。
• 血清封閉:在組化圈內(nèi)滴加3%BSA 均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
• 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的對應(yīng)一抗，切片平放于濕盒4°過夜孵育。
• 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加相對應(yīng)的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
• DAB顯色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加（稀釋液和濃縮液1000:50配制）新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時間，陽性為棕黃色，純水沖洗切片終止顯色。
• 復(fù)染細(xì)胞核：蘇木素染色2-3min左右，自來水洗，分化液分化2秒，自來水沖洗，返藍(lán)液返藍(lán)15-30s，流水沖洗。
• 脫水封片：將切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -無水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片.
• 顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
• 結(jié)果判讀：

蘇木素染出細(xì)胞核為藍(lán)色，DAB顯出的陽性表達(dá)為棕黃色

• 注意事項(xiàng)：

1． 注意切片脫蠟是否徹底；

2． 實(shí)驗(yàn)過程中切片勿干片；

3.  實(shí)驗(yàn)操作中小心槍頭掛傷組織。