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四標(biāo)建模(非常規(guī))

四標(biāo)建模(非常規(guī))

  • 價(jià)格¥3500
  • 單位
  • 貨號(hào)HKF2013
  • 品牌浩克

產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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【產(chǎn)品信息】

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號(hào)規(guī)格價(jià)格
四標(biāo)建模(非常規(guī))HKF20133500元

石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無(wú)水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%
酒精6min蒸餾水洗。
2、 抗原修復(fù):組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復(fù)液(PH6.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù),中火8min
停火8min中低火7min,此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
3、 阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶:切片加上3%的雙氧水,室溫孵育25min,將玻片置PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
4、 血清封閉:在組化圈內(nèi)滴加3%BSA 均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
5、 加一抗:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內(nèi)滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。
6、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
7、 信號(hào)放大:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min 。滴加相對(duì)應(yīng)顏色Flare信號(hào)放大試劑,3-5min.將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min 。雙標(biāo)或者多標(biāo)的實(shí)驗(yàn)從這一步結(jié)束后重復(fù)步驟2-7,標(biāo)記第二個(gè)、或者第三個(gè)抗體,最后在進(jìn)入步驟8即可。
8、DAPI復(fù)染細(xì)胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加
DAPI染液,避光室溫孵育10min。
9、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。


 

無(wú)

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