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四標建模(常規(guī)指標)

四標建模(常規(guī)指標)

  • 價格¥2000
  • 單位
  • 貨號HKF2012
  • 品牌浩克

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【產品信息】

產品名稱產品貨號規(guī)格價格
四標建模(常規(guī)指標)HKF20122000元

石蠟切片免疫熒光實驗步驟
1、 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無水乙醇Ⅰ6min -95%酒精6min-85%
酒精6min蒸餾水洗。
2、 抗原修復:組織切片置于盛滿檸檬酸抗原修復液(PH6.0)的修復盒中于微波爐內進行抗原修復,中火8min
?;?min中低火7min,此過程中應防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
3、 阻斷內源性過氧化物酶:切片加上3%的雙氧水,室溫孵育25min,將玻片置PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
4、 血清封閉:在組化圈內滴加3%BSA 均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
5、 加一抗:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在圈內滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內4°C孵育過夜。
6、 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加與一抗相應種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
7、 信號放大:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min 。滴加相對應顏色Flare信號放大試劑,3-5min.將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min 。雙標或者多標的實驗從這一步結束后重復步驟2-7,標記第二個、或者第三個抗體,最后在進入步驟8即可。
8、DAPI復染細胞核:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內滴加
DAPI染液,避光室溫孵育10min。
9、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。


 

暫無

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