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免疫組化
免疫組化
免疫組化
免疫組化
免疫組化

免疫組化(IHC)

  • 價格¥30
  • 單位
  • 貨號HKF2001
  • 品牌浩克

產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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【產(chǎn)品信息】

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號規(guī)格價格
免疫組化 ( IHC )HKF200130元

免疫組化石蠟切片實驗報告

  • 實驗原理

免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(ICC)。 

  • 實驗器材及試劑

1.主要實驗器材

名稱廠家名稱儀器編號
脫水機(jī)湖北貝諾醫(yī)療科技有限公司JT-12S
生物組織自動包埋機(jī)湖北貝諾醫(yī)療科技有限公司JB-L5
石蠟包埋機(jī)(冷臺)湖北貝諾醫(yī)療科技有限公司JB-L5
轉(zhuǎn)輪式切片機(jī)徠卡顯微系統(tǒng)上海有限公司RM2016
KD-P組織攤片機(jī)浙江金華科迪儀器設(shè)備有限公司Z51A011
烤箱天津市萊玻特瑞儀器設(shè)備有限公司GFL125
微波爐美的M1-L213B
載玻片及蓋玻片江蘇匯達(dá)醫(yī)療器械有限公司710510    
脫色搖床上海琪特分析儀器有限公司STS-3
渦旋儀秒生科技有限公司SI-A256 
掌上離心機(jī)上海吉泰生物科技有限公司MC2
顯微鏡NIKONECLIPSE E100
組化筆Gene techGT1001
移液槍DragonKE003068

2.主要實驗試劑

試劑名稱廠家名稱貨號
無水乙醇杭州宏達(dá)化工儀器有限公司SJ003614
二甲苯國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司10023418
PBS緩沖液杭州浩克生物技術(shù)有限公司 
20x檸檬酸抗原修復(fù)液(PH6.0)杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0001
BSA杭州浩克生物技術(shù)有限公司HK5021
組化試劑盒圖凌杭州生物醫(yī)藥有限公司I20012C
一抗:  
二抗:超敏兔鼠通用二抗杭州浩克生物技術(shù)有限公司HKI0029
蘇木素染液杭州浩克生物技術(shù)有限公司HK2053
鹽酸分化液國藥集團(tuán)化學(xué)劑有限公司HK2054
氨水水溶液返藍(lán)液MACKLINHK2055
中性樹膠國藥集團(tuán)化學(xué)劑有限公司10004160
  • 實驗步驟
  • 石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -無水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min,自來水洗2min。
  • 抗原修復(fù):組織切片置于盛滿xxxx抗原修復(fù)緩沖液(PH )的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù),中火8min至沸,?;?min保溫再轉(zhuǎn)中低火7min,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
  • 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶:切片加上3%的雙氧水,室溫孵育25min,將玻片置PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。
  • 畫圈:用組化專用的組化筆沿著組織外圍輪廓畫一個與組織間隔3-4毫米的小圈,然后加入足量的PBS保證后續(xù)依次加入的封閉血清,一抗,二抗,以及顯色劑能完全覆蓋組織,而不沿著玻片流走。
  • 血清封閉:在組化圈內(nèi)滴加3%BSA 均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
  • 加一抗:輕輕甩掉封閉液,在切片上滴加按一定比例配好的對應(yīng)一抗,切片平放于濕盒4°過夜孵育。
  • 加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加相對應(yīng)的二抗覆蓋組織,室溫孵育50min。
  • DAB顯色:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加(稀釋液和濃縮液1000:50配制)新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時間,陽性為棕黃色,純水沖洗切片終止顯色。
  • 復(fù)染細(xì)胞核:蘇木素染色2-3min左右,自來水洗,分化液分化2秒,自來水沖洗,返藍(lán)液返藍(lán)15-30s,流水沖洗。
  • 脫水封片:將切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -無水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脫水透明,將切片從二甲苯拿出來稍晾干,中性樹膠封片.
  • 顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
  • 結(jié)果判讀:

蘇木素染出細(xì)胞核為藍(lán)色,DAB顯出的陽性表達(dá)為棕黃色

  • 注意事項:

1. 注意切片脫蠟是否徹底;

2. 實驗過程中切片勿干片;

3.  實驗操作中小心槍頭掛傷組織。

暫無

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