| 貨號(hào) | 品名 | 50T | 100T |
| HKI0010-1 | AF488熒光反應(yīng)液 | 2.5ml | 5ml |
| HKI0010-2 | TdT酶 | 50ul | 100ul |
【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
細(xì)胞在發(fā)生凋亡時(shí)，會(huì)激活一些 DNA 內(nèi)切酶，這些內(nèi)切酶會(huì)切斷核小體間的基因組 DNA。 細(xì)胞凋亡時(shí)抽提 DNA 進(jìn)行電泳檢測(cè)，可以發(fā)現(xiàn) 180-200bp 的 DNAladder。基因組 DNA 斷裂時(shí)， 暴露的 3′-OH 可以在末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase,TdT) 的催化下加上綠色 AF488 標(biāo)記的dUTP，從而可以通過(guò)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，這就 是 TUNEL(TdT-mediated dUTPNick-End Labeling)法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的原理
【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】
冰袋運(yùn)輸，-20?C 儲(chǔ)存，可穩(wěn)定儲(chǔ)存一年。【使用方法】
石蠟切片熒光tunel實(shí)驗(yàn)步驟
石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯 Ⅰ 15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇 Ⅰ5min-無(wú)水 乙醇Ⅱ5min，取出置于通風(fēng)廚內(nèi)等酒精晾干后放入自來(lái)水中稍洗，蒸餾水洗。(冬天應(yīng)提高脫蠟 溫度或適當(dāng)延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間)
通透：pH6.0 檸檬酸修復(fù)液中火修復(fù)8min ，室溫冷卻，用免疫組化筆劃圈，之后純水洗三 次(重要)。 (通透方式有多鐘：1 蛋白酶消化，2tritonx100 通透劑通透，檸檬酸修復(fù))
配試劑工作液以及孵育：熒光反應(yīng)液和 TdT 酶按 50:1 比例混合，此液為 tunel 工作液，， 將 tunel 工作液加入到圈內(nèi)覆蓋組織，切片平放于濕盒內(nèi)，37℃恒溫箱孵育 1 到 2 小時(shí)，濕盒 內(nèi)加少量水保持濕度。
DAPI 復(fù)染細(xì)胞核：切片用 PBS (PH7.4) 洗滌 3 次，每次 5min。去除 PBS 后在圈內(nèi)滴加 DAPI 染液，避光室溫孵育 10min。
封片：玻片置于 PBS (PH7.4) 中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌 3 次，每次5min。切片稍甩干后用 抗熒光淬滅封片劑封片。
鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。
石蠟切片熒光tunel結(jié)果判讀
DAPI 染出來(lái)的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，試劑盒為 AF488 標(biāo)記，陽(yáng)性凋亡細(xì)胞核為綠 色。
【注意事項(xiàng)】
1. 本試劑僅供科研。
2. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴一次性手套。
杭州浩克生物
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