【產(chǎn)品簡介】
酪酰胺信號放大(TSA)系統(tǒng)可用于檢測熒光免疫細胞化學(xué)(ICC)、免疫組織化學(xué)(IHC) 中的低豐度靶點,可將信號靈敏度提高100倍。TSA 熒光試劑盒使用辣根過氧化物酶(HRP)直接催化固定化酶周圍的熒光基團共價沉積,形成永久性共價鍵結(jié)合。在運用HRP二抗及一抗在室溫下由抗體洗脫液脫離掉抗原失活的原理,重復(fù)此過程,即可實現(xiàn)同種屬熒光雙標(biāo)及熒光三標(biāo)以及多標(biāo)(注:此過程僅適用于冰凍切片、細胞爬片的熒光多標(biāo))。
此試劑盒中的熒光探針可單獨或配合使用。可以實現(xiàn)單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)、四標(biāo)或熒光放大等功能不受一抗種屬的影響,極大豐富了熒光多色的內(nèi)容。
【儲存與運輸】
冰袋(wet ice)運輸;-20℃長期保存,短期于4℃保存,有效期 12 個月。
【使用方法】
細胞爬片
1.固定通透
在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min,用4%多聚甲醛固定15min,PBS浸洗3此,每次3min。細胞通透劑(貨號:HKI0048)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原可省略)。
2.封閉處理
PBS浸洗3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,滴入封閉液(貨號:HKW2085/86/87/99)完全覆蓋細
胞,室溫封閉30min。
3.一抗孵育
棄掉封閉液,滴加用通用抗體稀釋液(貨號:HKW2083)適當(dāng)比例稀釋的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜(或37℃濕盒孵育2h)。
4.二抗孵育
PBST浸洗3次,每次3敏,吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記二抗,濕盒中37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。
5.加TSA 信號放大試劑
根據(jù)需要標(biāo)記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 信號放大試劑,孵育3-10min可具體根據(jù)預(yù)實驗條件。如遇標(biāo)記效果差的可添加熒光增強劑進一步加強,增強劑:熒光試劑1:500正常孵育,濃度也可摸索使用。
6. 熒光多色實現(xiàn)
抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解,滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞,37℃放置8分鐘,棄去洗脫液,再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞,37℃放置8分鐘,棄洗脫液,PBS浸洗3次,每次5min,洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗,再重復(fù)步驟3-5,實現(xiàn)熒光多色。
7.DAPI復(fù)染細胞核
8.抗熒光淬滅封片劑封片
9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描
冰凍切片
- 復(fù)溫固定
冰凍切片室溫防置30min后,入純甲醇固定10min。(亦可采用其他固定方式)
2.阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和血清封閉
PBS浸洗切片3次,每次5min,用過氧化物酶阻斷劑(貨號:HKI0047)孵育25min,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,滴入封閉液(貨號:HKW2085/86/87/99)37℃孵育20min。
3.一抗孵育
棄掉封閉液,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜。
4.二抗孵育
PBST浸洗3次,每次3敏,吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記二抗,濕盒中37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。
5.加TSA 信號放大試劑
根據(jù)需要標(biāo)記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 放大試劑,孵育3-10min可具體根據(jù)預(yù)實驗條件。如遇標(biāo)記效果差的可添加熒光增強劑進一步加強,增強劑:熒光試劑1:500正常孵育,濃度也可摸索使用。
6.熒光多色實現(xiàn)
抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解,滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋組織,37℃放置8分鐘,棄去洗脫液,再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞,37℃放置8分鐘,棄洗脫液,PBS浸洗3次,每次5min,洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗,再重復(fù)步驟3-5,實現(xiàn)熒光多色。
7.DAPI復(fù)染細胞核
8.抗熒光淬滅封片劑封片
9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描
【注意事項】
1.本產(chǎn)品僅作科研用途。
2.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
3. POLY-HRP羊抗兔二抗屬于附贈試劑,不足100T劑量,可根據(jù)需要回購。
4.樣本來源為兔(或小鼠),若出現(xiàn)較高非特異性熒光著色,一抗為兔抗(或鼠抗)時,可采用POLY-HRP羊抗兔二抗(貨號:HKI0026)或POLY-HRP羊抗鼠二抗(貨號:HKI0027)。
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