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熒光四標(biāo)信號放大試劑盒(冰凍切片、細胞爬片適用)

熒光四標(biāo)信號放大試劑盒 (冰凍切片、細胞爬片適用)

  • 價格暫不供貨
  • 貨號HKI0000-4A
  • 規(guī)格100T
  • 單位
  • 品牌HaoKebio

產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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【產(chǎn)品簡介】

酪酰胺信號放大(TSA)系統(tǒng)可用于檢測熒光免疫細胞化學(xué)(ICC)、免疫組織化學(xué)(IHC)   中的低豐度靶點,可將信號靈敏度提高100倍。TSA 熒光試劑盒使用辣根過氧化物酶(HRP)直接催化固定化酶周圍的熒光基團共價沉積,形成永久性共價鍵結(jié)合。在運用HRP二抗及一抗在室溫下由抗體洗脫液脫離掉抗原失活的原理,重復(fù)此過程,即可實現(xiàn)同種屬熒光雙標(biāo)及熒光三標(biāo)以及多標(biāo)(注:此過程僅適用于冰凍切片、細胞爬片的熒光多標(biāo))。

此試劑盒中的熒光探針可單獨或配合使用。可以實現(xiàn)單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)、四標(biāo)或熒光放大等功能不受一抗種屬的影響,極大豐富了熒光多色的內(nèi)容。

【儲存與運輸】

冰袋(wet ice)運輸;-20℃長期保存,短期于4℃保存,有效期 12 個月。

使用方法

細胞爬片

1.固定通透

在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min,用4%多聚甲醛固定15min,PBS浸洗3此,每次3min。細胞通透劑(貨號:HKI0048)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原可省略)。

2.封閉處理

PBS浸洗3次,每次3min,吸水紙吸干PBS,滴入封閉液(貨號:HKW2085/86/87/99)完全覆蓋細

胞,室溫封閉30min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液,滴加用通用抗體稀釋液(貨號:HKW2083)適當(dāng)比例稀釋的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜(或37℃濕盒孵育2h)。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次,每次3敏,吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記二抗,濕盒中37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。

5.加TSA 信號放大試劑

根據(jù)需要標(biāo)記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 信號放大試劑,孵育3-10min可具體根據(jù)預(yù)實驗條件。如遇標(biāo)記效果差的可添加熒光增強劑進一步加強,增強劑:熒光試劑1:500正常孵育,濃度也可摸索使用。

6. 熒光多色實現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解,滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞,37℃放置8分鐘,棄去洗脫液,再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞,37℃放置8分鐘,棄洗脫液,PBS浸洗3次,每次5min,洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗,再重復(fù)步驟3-5,實現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復(fù)染細胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

冰凍切片

  1. 復(fù)溫固定

冰凍切片室溫防置30min后,入純甲醇固定10min。(亦可采用其他固定方式)

2.阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和血清封閉

PBS浸洗切片3次,每次5min,用過氧化物酶阻斷劑(貨號:HKI0047)孵育25min,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶,滴入封閉液(貨號:HKW2085/86/87/99)37℃孵育20min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液,滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗并放入濕盒,4℃孵育過夜。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次,每次3敏,吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標(biāo)記二抗,濕盒中37℃孵育1h,PBST浸洗3次,每次3min。

5.加TSA 信號放大試劑

根據(jù)需要標(biāo)記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 放大試劑,孵育3-10min可具體根據(jù)預(yù)實驗條件。如遇標(biāo)記效果差的可添加熒光增強劑進一步加強,增強劑:熒光試劑1:500正常孵育,濃度也可摸索使用。

   6.熒光多色實現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解,滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋組織,37℃放置8分鐘,棄去洗脫液,再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞,37℃放置8分鐘,棄洗脫液,PBS浸洗3次,每次5min,洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗,再重復(fù)步驟3-5,實現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復(fù)染細胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

【注意事項】

1.本產(chǎn)品僅作科研用途。

2.為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

3. POLY-HRP羊抗兔二抗屬于附贈試劑,不足100T劑量,可根據(jù)需要回購。

4.樣本來源為兔(或小鼠),若出現(xiàn)較高非特異性熒光著色,一抗為兔抗(或鼠抗)時,可采用POLY-HRP羊抗兔二抗(貨號:HKI0026)或POLY-HRP羊抗鼠二抗(貨號:HKI0027)。

熒光四標(biāo)信號放大試劑盒(冰凍切片、細胞爬片適用)

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號50T100T有效期
Flare520HKI0014  2.5ml     5ml  12 個月
Flare570HKI0015
Flare690HKI0017
Flare620HKI0016
POLY-HRP羊抗兔二抗(可選)HKI0026
抗體洗脫液HKI0045
DAPI染色液(即用型)HKI0005
抗熒光淬滅封片劑HKI0007
TSA熒光信號增強劑HKI004625ul50ul

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