簡(jiǎn)介:熒光定量PCR是通過熒光染料(SYBR Green)或熒光標(biāo)記的特異性的探針,對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤,實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程,結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析,計(jì)算待測(cè)樣品模板的初始濃度。可以用于檢測(cè)mRNA、lncRNA、circRNA、miRNA的基因表達(dá)水平。最終所得的PCR產(chǎn)物可以通過瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)一步驗(yàn)證引物特異性。
實(shí)驗(yàn)流程:
1.接收樣本
2.組織勻漿、細(xì)胞和血液樣本吹打裂解-RNA提取-RNA濃度測(cè)定—逆轉(zhuǎn)錄成cdna—熒光定量PCR-(PCR產(chǎn)物電泳)-數(shù)據(jù)分析
其中mRNA為普通逆轉(zhuǎn)錄,lncRNA可選采取普通和特異性逆轉(zhuǎn)錄,circRNA和miRNA采取特異性逆轉(zhuǎn)錄
3.交付結(jié)果:完整項(xiàng)目報(bào)告(擴(kuò)增曲線、數(shù)據(jù)分析、引物信息、實(shí)驗(yàn)報(bào)告)
實(shí)驗(yàn)周期:60個(gè)循環(huán)內(nèi),7個(gè)工作日內(nèi)出結(jié)果
樣品要求:
1、組織: 100mg(黃豆大小),最少50mg(綠豆大小),脂肪組織,結(jié)締組織,纖維化組織適當(dāng)增加。
2、細(xì)胞:1×10^6個(gè)細(xì)胞,貼壁細(xì)胞舒展,未變圓;
3、全血:2mL,最少1mL新鮮血液EDTA抗凝管;
4、血清:2mL,干冰運(yùn)輸;
5、植物:葉、果肉、種子等需100mg,最少50mg。
6、RNA樣品:純度OD260/280 比值為1.8-2.0,濃度≥500ng/ul,體積≥20ul。
7、cdna:cdna原液20uL。
樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本
1.動(dòng)植物組織樣本、細(xì)胞樣本、血清、RNA、cDNA以干冰運(yùn)輸;
2.細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染、灌滿培養(yǎng)液不漏出),常溫運(yùn)輸;
3.全血樣本是EDTA抗凝管4度運(yùn)輸。
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