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RIPA 總蛋白裂解液(中)

RIPA 總蛋白裂解液(中)

  • 價(jià)格¥120
  • 規(guī)格100ml
  • 貨號(hào)HKW2011B
  • 單位
  • 品牌HaoKebio

產(chǎn)品介紹
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【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

RIPA 裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細(xì)胞及組織快速裂解液。RIPA 裂解液有很多配方,按其裂解效果主要分為強(qiáng),中,弱三種。RIPA 強(qiáng)解液裂解組織、細(xì)胞得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的 PAGE、Western 等對(duì)蛋白活性沒(méi)有嚴(yán)格要求的實(shí)驗(yàn)。本產(chǎn)品主要成分包含 50 mM Tris-HCl (pH 7.4),150 mM NaCl,1 mM EDTA-2Na,1% Triton X-100,1%脫氧膽酸鈉及 0.1% SDS。

本產(chǎn)品適用于動(dòng)物或植物組織及細(xì)胞樣品,也可用于真菌或細(xì)菌樣品。

【產(chǎn)品組成 】

產(chǎn)品目錄主要成分產(chǎn)品規(guī)格
RIPA?總蛋白裂解液(中)脫氧膽酸鈉100mL

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

冰袋(wet ice)運(yùn)輸;4℃避光保存,有效期 18 個(gè)月。

【使用方法】

自備蛋白酶抑制劑。RIPA 裂解液(強(qiáng))在臨用前需加入蛋白酶抑制劑,防止蛋白降解。

以下使用方法中提到的 RIPA 裂解液(強(qiáng))均指已添加蛋白酶抑制劑。

組織樣品實(shí)驗(yàn)

1. 組織塊用預(yù)冷 PBS洗滌,去除血污,剪成細(xì)小碎塊置于勻漿器中。

2. 加入 10 倍組織體積 RIPA 裂解液(強(qiáng))低溫勻漿注意,RIPA 裂解液(強(qiáng))的使用量可按照約每 50 mg 組織與 1 mL 裂解液的比例添加。如組織蛋白含量較低,可降低裂解液的用量,以提高粗提溶液中的蛋白濃度。

3. 將勻漿液轉(zhuǎn)移至 1.5 mL 離心管中,振蕩。冰浴 30 min,期間每 10 min 用移液器反復(fù)吹打,確保組織細(xì)胞完全裂解;

4. 12000g 離心 5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

對(duì)于貼壁細(xì)胞樣品:

1. 用 PBS 清洗細(xì)胞 2-3 次,最后一次徹底吸干殘留液。

2. 按照 6 孔板每孔細(xì)胞 250 μL 裂解液的比例吸取 RIPA 裂解液(強(qiáng))于細(xì)胞培養(yǎng)板、瓶?jī)?nèi),反復(fù)晃動(dòng)培養(yǎng)板、瓶,使裂解液與細(xì)胞充分接觸 3-5 min。

3. 用細(xì)胞刮刀將細(xì)胞刮下,收集到離心管中。

4. 12000 g 離心 5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

對(duì)于懸浮細(xì)胞樣品:

  1. 離心收集細(xì)胞。
  2. 按照 6 孔板每孔細(xì)胞 250 μL 裂解液的比例將細(xì)胞液與 RIPA 裂解液(強(qiáng))混合,振蕩。
  3. 冰浴 30 min,期間每 10 min 用移液器反復(fù)吹打數(shù)次,確保細(xì)胞完全裂解。
  4. 12000 g 離心 5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

對(duì)于細(xì)菌或真菌樣本:

  1. 取 1 mL 菌懸液,離心去上清,PBS 洗滌一次,充分去除液體。渦旋使菌體盡量分散。
  2. 加入 100-200 μL RIPA 裂解液(強(qiáng)),輕輕渦旋使菌體與裂解液充分混勻。
  3. 冰浴 10 min,期間每 2 min 用移液器反復(fù)吹打數(shù)次,確保菌體完全裂解。
  4. 12000 g 離心 5 min,收集上清,即為總蛋白溶液。

【注意事項(xiàng)】

  1. 組織或細(xì)胞裂解時(shí)若會(huì)出現(xiàn)粘稠狀??捎靡埔浩鞣磸?fù)吹打或振蕩器振蕩,直至呈液狀為止。如果一直較稠,可再加入適量裂解液。
  2. 本試劑不含有蛋白酶抑制劑,需自備蛋白酶抑制劑并在臨用前加入。
  3. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服,并佩戴一次性手套。
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