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  一、實驗器材及試劑

  1、實驗器材
 

名稱 廠家 型號
脫水機 武漢俊杰電子有限公司 JJ-12J
包埋機 武漢俊杰電子有限公司 JB-P5
病理切片機 上海徠卡儀器有限公司 RM2016
凍臺 武漢俊杰電子有限公司 JB-L5
組織攤片機 浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司 KD-P
烤箱 天津市萊玻瑞儀器設(shè)備有限公司 GFL-230
載玻片 haokebio  
正置光學(xué)顯微鏡 日本尼康 Nikon Eclipse E100
成像系統(tǒng) 日本尼康 Nikon DS-U3

  2、主要實驗試劑
 

試劑名稱 廠家 貨號
無水乙醇 國藥集團化學(xué)試劑有限公司 100092683
鹽酸 國藥集團化學(xué)試劑有限公司  
冰醋酸 國藥集團化學(xué)試劑有限公司  
改良苯酚品紅染液 haokebio  
甘油明膠封片劑 haokebio G1402

 

  二、實驗步驟

  1、取材:查閱相關(guān)植物對應(yīng)的根尖分裂旺盛期,在此期間剪取新生根尖約2-3cm,純水稍洗凈。

  2、預(yù)處理:用秋水仙素或者8-羥基喹啉預(yù)處理或者置于純水中4℃處理約24h(選做)。

  3、固定:取出根尖置于卡諾氏固定液(無水乙醇:冰醋酸=3:1混勻)中4℃固定約1-4h,轉(zhuǎn)移根尖至75%的乙醇中保存;

  4、低滲:取出根尖純水稍洗2遍,置于純水中浸泡約30min;

  5、解離:取出根尖置于1M HCL溶液中60℃處理10-30min,純水洗2遍,置于純水中浸泡約30min;

  6、取材染色:將根尖用純水清洗2遍后置于載玻片上,切取根尖分生區(qū)并撥散,組畫筆畫圈,晾干或者稍烤干分生區(qū)組織細(xì)胞,滴加改良苯酚品紅染液染色15-35min;

  7、壓片:直接用染色液封片,稍吸除多余的染色液,蓋玻片上覆蓋濾紙,用橡皮擦或者手指平整地按壓玻片進(jìn)行壓片,分散染色體;

  8、封片:將制好的玻片放置-20℃下冰凍約10min,取出后用刀片從蓋玻片一角迅速撬開,晾干或烤干載玻片和蓋玻片,甘油明膠或中性樹膠封片。

  9、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。

 

  三、結(jié)果判讀:

  染色體呈深的紫紅色,背景淺的紫紅色或者無色。

 

  四、注意事項:

  1、若固定后的根尖暫時不使用,保存在75%的乙醇中,下次使用前需要再次固定,4℃條件下約4h。

  2、壓片過程中,防止蓋玻片移動或者破裂,得到數(shù)量清晰的染色體,此步驟操作較難成功。

  3、改良苯酚品紅染色液陰涼通風(fēng)處可保存1年不變質(zhì)。

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