BODIPY染色

【產(chǎn)品信息】

冰凍切片實驗步驟
1、?冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來復(fù)溫，晾干水分，純甲醇固定10min，待純甲醇稍干后置于烤箱5min，然后置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。
2、?染色：冰凍切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加BODIPY染液濃度
1:1000（濃度可根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果調(diào)整），避光恒溫箱37°孵育30min。
3、?DAPI復(fù)染細胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加
DAPI染液，避光室溫孵育10min。
4、?封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
5、?鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。
（紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm；FITC綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm）