杭州浩克生物
WB（普通蛋白）
1228服務(wù)介紹： 實(shí)驗(yàn)流程： 蛋白提取-制膠-電泳-轉(zhuǎn)膜-封閉-一抗孵育-二抗孵育-化學(xué)發(fā)光-結(jié)果分析; 送樣運(yùn)輸要求： 新鮮組織，100mg以上，干...
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產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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【產(chǎn)品信息】
| 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
| BRDU檢測（DAB） | HKF2035 | 張 | 45元 |
一、 實(shí)驗(yàn)原理
免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對(duì)其進(jìn)行定位、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(IHC)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(ICC)。
二、 實(shí)驗(yàn)步驟
1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min -無水乙醇Ⅰ6min- 95%酒精6min- 85%酒精6min，自來水洗2min。
2. 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿xxxx抗原修復(fù)緩沖液（PH ）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)，中火8min至沸，?；?min保溫再轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4
）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
3. 阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：切片加上3%的雙氧水，室溫孵育25min，將玻片置PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
4. 畫圈：用組化專用的組化筆沿著組織外圍輪廓畫一個(gè)與組織間隔3-4毫米的小圈，然后加入足量的PBS保證后續(xù)依次加入的封閉血清，一抗，二抗，以及顯色劑能完全覆蓋組織，而不沿著玻片流走。
5. 血清封閉:在組化圈內(nèi)滴加3%BSA 均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。
6. 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加按一定比例配好的對(duì)應(yīng)一抗，切片平放于濕盒4°過夜孵育。
7. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加相對(duì)應(yīng)的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
8. DAB顯色：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加（稀釋液和濃縮液1000:50配制）新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下控制顯色時(shí)間，陽性為棕黃色，純水沖洗切片終止顯色。
9. 復(fù)染細(xì)胞核：蘇木素染色2-3min左右，自來水洗，分化液分化2秒，自來水沖洗，返藍(lán)液返藍(lán)15-30s，流水沖洗。
10. 脫水封片：將切片依次放入75%酒精5min-85%酒精5min -95%酒精5min -無水乙醇5min -二甲苯Ⅰ5min -二甲苯Ⅱ5min 中脫水透明，將切片從二甲苯拿出來稍晾干，中性樹膠封片.
11. 顯微鏡鏡檢，圖像采集分析。
三、 結(jié)果判讀：
蘇木素染出細(xì)胞核為藍(lán)色，DAB顯出的陽性表達(dá)為棕黃色
四、 注意事項(xiàng)：
1． 注意切片脫蠟是否徹底；
2． 實(shí)驗(yàn)過程中切片勿干片；
3. 實(shí)驗(yàn)操作中小心槍頭掛傷組織。
