Trans Plus 細胞轉染試劑

制膠 蛋白質生物學 試劑

• 價格￥690
• 規(guī)格1ml
• 貨號HKR063
• 單位支
• 品牌HaoKebio

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【產品信息】

【產品簡介】

Trans Plus 細胞轉染試劑，作為新一代的轉染試劑，其轉染原理是帶正電的聚合物與核酸分子的帶負電的磷酸基團形成帶正電的復合物后，與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。

本產品經過本公司的優(yōu)化處理，具有轉染效率高，細胞毒性低，操作簡單，重復性好，適用范圍廣等特點?

【儲存與運輸】

藍冰運輸， 4℃保存，有效期一年。（不可冰凍）

【使用方法】
使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉染請參考表 1）

1． 接種細胞

對于貼壁細胞，轉染前 18-24 h 進行鋪板（不含抗生素），使其在轉染時的密度大約在 80%左右。對于懸浮細胞，轉染當天，在配制 Trans-DNA 復合物之前進行鋪板，每 500 μL 生長培養(yǎng)基中加入 4~8×105cells。

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉染效率。轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設置梯度進行優(yōu)化最佳使用量。

2．準備 Trans-DNA 復合物

(1) 對于每孔細胞，將 1 μg 質粒 DNA 稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基（或OPTI-MEM I 培養(yǎng)基），混勻。

(2) 對于每孔細胞，將 3 μL Trans 轉染試劑稀釋到 40 μL 無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基（或者 OPTI-MEM I 培養(yǎng)基），輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖 DMEM 培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進行 DNA 和 Trans轉染試劑的稀釋。因為 Trans-DNA 轉染復合物的形成過程不能含有血清。

(3) 將稀釋好的 Trans 轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質粒 DNA 中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進行。

3．轉染細胞

(1) 將上述 80 μL Trans-DNA 轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓 Trans-DNA 復合物分散均勻。

(2) 在 37℃，5% CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng) 6-18 h，去除含 Trans-DNA 復合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉入基因表達分析。

【注意事項】

1. 本產品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領域。

2. 質粒質量：請務必使用高純度無內毒素轉染級質粒。通過 260 nm 光吸收測定 DNA 濃度，260nm / 280 nm 比值確定 DNA 純度（比值應該在 1.8～2.0 的范圍之內）。如有可能，請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。

3. 細胞條件：使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保細胞沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞，請在轉染前至少傳代兩次。建議使用李記生物的胎牛血清（貨號：AC03L055）培養(yǎng)細胞。

4. 細胞培養(yǎng)液要求： Trans 細胞轉染試劑可用于有血清培養(yǎng)基的轉染，并且轉染前不需要換培養(yǎng)基。但是，制備轉染復合物時要求用無血清培養(yǎng)基稀釋 DNA 和轉染試劑，因為血清會影響復合物的形成。確保細胞培養(yǎng)液沒有被細菌、真菌或支原體污染。轉染時培養(yǎng)液中不添加抗生素。

5. 試劑用量的優(yōu)化：DNA 濃度和轉染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，初次使用應優(yōu)化 DNA 濃度和轉染試劑量以得到最大的轉染效率。使用者可嘗試每 1 μg DNA 使用 1～4 μL 體積 Trans 細胞轉染試劑進行優(yōu)化。DNA 和轉染試劑的比例，通常推薦是 1:2~1:5。

表 1：不同培養(yǎng)體積對應的待轉 RNA、 Trans、稀釋液用量

使用時 DNA（μg）: Trans 細胞轉染試劑（μL）比值保持在 1:2~1:5。