BCA蛋白定量試劑盒

【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】

冰袋運(yùn)輸；蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 (BSA) 4℃保存，有效期 12 個(gè)月。配制成的蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液后需 -20℃ 保存，并在 6 個(gè)月內(nèi)使用。其余試劑常溫保存，有效期 12 個(gè)月。

【使用方法】

1. 配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)貯備液：取 1 mL 蛋白標(biāo)準(zhǔn)配制液加入到蛋白標(biāo)準(zhǔn)品 (BSA) 蛋白標(biāo)準(zhǔn)管

中，將 25 mg 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品完全溶解，即得到濃度為 25 mg/mL 的蛋白標(biāo)準(zhǔn)貯備液。配制成的蛋 白標(biāo)準(zhǔn)溶液可-20℃ 長(zhǎng)期保存。

2. 配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液：取適量 25 mg/mL 蛋白標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用 PBS 或生理鹽水稀釋 50

倍，得到終濃度為 0.5 mg/mL 的蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液。注意稀釋時(shí)按照 10 倍梯度方法稀釋，確保 稀釋準(zhǔn)確。

3. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 (酶標(biāo)儀法) ：將蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液分別按 0，1，2，4，8，12，16，20 μ L 加到 96 孔 板中，然后用 PBS 或生理鹽水依次加 20，19，18，16，12，8，4，0 μL 將上 述梯度工作液補(bǔ)足到 20 μL。得到蛋白濃度依次為 0，25，50，100，200，300，400，500 μ g/mL 的梯度曲線。

4. 準(zhǔn)備待測(cè)樣品：將待測(cè)的蛋白樣品進(jìn)行適當(dāng)稀釋 (可通過預(yù)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，使樣品蛋白濃度 在標(biāo)準(zhǔn)曲線范 圍內(nèi)，確保檢測(cè)結(jié)果可信) ，按照每個(gè)樣品 20 μL 的量加到 96 孔板中。待測(cè) 樣品與蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用相 同溶液稀釋。

5. 配制 BCA 顯色工作液：將 BCA 試劑與硫酸銅溶液按照 50:1 體積比充分混合均勻， 得到 BCA 顯色工作液。BCA 顯色工作液可室溫保存，24 h 內(nèi)使用。每個(gè)待測(cè)樣品需 200 μL ，建議按需配制，避免浪費(fèi)。

6. 檢測(cè)：向標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品孔及待測(cè)樣品孔中每孔加入 BCA 顯色工作液 200 μL，充分混 勻 (可將 96 孔板放在振蕩器上振蕩 30 s) ，37℃反應(yīng) 30 min 后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線 0 號(hào)做參比 ，在 562 nm 波長(zhǎng)下比色測(cè)定，  記錄各孔吸光度值。  (注：也可以在室溫反應(yīng) 2 h，或 60℃ 反應(yīng) 30 min。如果蛋白濃度較低，建議置 于 60℃反應(yīng))

7. 計(jì)算：以標(biāo)準(zhǔn)曲線中梯度蛋白含量 ( μg/mL) 為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn) 曲線。根據(jù)所測(cè) 樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)孔中待測(cè)樣品的蛋白濃度 ( μg/mL ) ，再乘以樣品稀釋倍數(shù)即為待測(cè)樣品實(shí)際蛋白濃度。議按需配制，避免浪費(fèi)。

【注意事項(xiàng)】

1.BCA 法測(cè)定蛋使用 BCA 蛋白測(cè)定法測(cè)定時(shí)顏色會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深，并且顯色 反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，因此需注意保持定時(shí)和定溫，以確保精確定量，若顯色反應(yīng)時(shí)間和溫 度無法精確控制，宜每次都做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.在進(jìn)行蛋白標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制時(shí)，需確保溶解充分。稀釋配制蛋白標(biāo)準(zhǔn)工作液時(shí)建議 10 倍梯度稀釋，  不要一次稀釋 50 倍，以免產(chǎn)生較大誤差。

3.低溫或長(zhǎng)期保存，若發(fā)現(xiàn) BCA 試劑 A 或者試劑 B 有沉淀發(fā)生。請(qǐng) 37oC 溫育并伴隨攪 拌促使其充分溶解。如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染，則應(yīng)舍棄，避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。

4. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。