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  簡介:

  質(zhì)粒轉(zhuǎn)化:攜帶外源DNA片段的質(zhì)粒進(jìn)入感受體細(xì)胞后,在細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制。多用于后期提取質(zhì)粒。

  質(zhì)粒提?。?/strong>即去除 RNA,將質(zhì)粒與細(xì)菌基因組DNA分開,去除蛋白質(zhì)及其它雜質(zhì),以得到相對純凈的質(zhì)粒。目前實(shí)驗(yàn)室涉及較多的為大量提取和小量提取。

  實(shí)驗(yàn)步驟:(以質(zhì)粒樣本提取大量質(zhì)粒為例)

  1. 從-80℃冰箱中取出對應(yīng)的感受態(tài)細(xì)胞,室溫下置于冰盒上解凍,標(biāo)記;

  2. 向感受態(tài)細(xì)胞中加入2µl的質(zhì)粒,置于4℃冰箱中,冰浴30min;

  3. 在42℃水浴鍋中熱激90s,然后立即在冰盒上放置2min;

  4. 每管加1mL LB培養(yǎng)基,37℃搖床震蕩,220rpm×30min;

  5. 取100µl 轉(zhuǎn)化液加入對應(yīng)抗性的平板中,倒入適量玻璃珠,涂勻液體;

  6. 將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。

  7. 挑選克隆子接種于1mL含對應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基,37℃,220rpm振蕩培養(yǎng)過夜。

  8. 按1/1000的比例,接種于200mL對應(yīng)抗性的LB液體培養(yǎng)基,37℃,220rpm振蕩培養(yǎng)過夜。

  9. 4℃下8000rpm離心收集菌體,用無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒提取質(zhì)粒。

  實(shí)驗(yàn)周期:7個(gè)工作日

  實(shí)驗(yàn)要求:甘油菌50ul;質(zhì)粒樣品,20ng/ul,20ul。干冰運(yùn)輸。

  注明甘油菌和質(zhì)粒的抗性。

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