DAB緩沖液

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

DAB 是過(guò)氧化物酶（POD）的顯色底物，DAB 顯色液主要用于免疫過(guò)氧化物酶法，適用于辣根過(guò)氧化物酶 HRP 標(biāo)記的免疫印記或免疫組化反應(yīng)。過(guò)氧化物酶催化底物發(fā)生反應(yīng)，于反應(yīng)部位產(chǎn)生棕色沉淀物，免疫印記可直接在膜上顯示條帶；免疫組化標(biāo)本顯色時(shí)間一般為室溫 5-20分鐘，隨后在顯微鏡下觀察顯色情況，顯色充分后應(yīng)將標(biāo)本及時(shí)脫水封固，其終產(chǎn)物可直接在光鏡下觀察，也可經(jīng) OsO4處理后，增加反應(yīng)產(chǎn)物的電子密度，用于電鏡觀察。

本 DAB 緩沖液可保護(hù)過(guò)氧化氫及延緩 DAB 氧化作用，色原與底物緩沖液混合后，可延長(zhǎng)保存。

【儲(chǔ)存與運(yùn)輸】

-20℃避光密閉保存，一年有效，避免反復(fù)凍融；短期可 2-8℃保存。

【使用方法】

常規(guī)脫蠟水化：石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟和水化。

抗原熱修復(fù)：參照一抗說(shuō)明書進(jìn)行抗原修復(fù)。

DAB?工作液的配制：

按每毫升 DAB 緩沖液 (試劑 B) 中加入 50 μL DAB 色原 (試劑 A) ?(約 1 滴) 的比例配制?DAB 工作液，DAB?工作液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。配制好的 DAB?工作液需在 2 小時(shí)內(nèi)使用，如出現(xiàn)沉淀，?使用前先混勻。

操作步驟：

1) 抗原修復(fù)完畢后自然冷卻的切片，用自來(lái)水清洗。

2) 除去切片上組織周圍的液體，用免疫組化筆圈定玻片上的待測(cè)組織區(qū)域并放入 PBST 緩 沖液中。

3)?取出切片，除去 PBST 緩沖液，滴加內(nèi)源性過(guò)氧化物酶阻斷劑 (視切片大小以完全覆蓋 切片組織為宜) ，于組織上孵育 10 分鐘，用 PBST 清洗切片。

4)除去 PBST 緩沖液，滴加 100μL 左右一抗工作液(視切片大小以完全覆蓋切片組織為宜)，?于組織上進(jìn)行孵育 (按照各自一抗說(shuō)明書操作) 。一抗孵育完畢，用 PBST?清洗切片。

5) 除去 PBST 緩沖液，每張切片加酶標(biāo)羊抗鼠/兔 IgG 聚合物 100μL?左右 (視切片大小以?完全覆蓋切片組織為宜) ，室溫下孵育 30 分鐘。PBST 緩沖液清洗切片。

6) 用預(yù)備好的 DAB 工作液進(jìn)行顯色，每張切片加 100μL 左右 DAB?工作液 (視切片大小以?完全覆蓋切片組織為宜) ，顯色時(shí)間為 1-5 分鐘 (鏡檢控制染色) ，用自來(lái)水沖洗終止顯色反 應(yīng)。

7) 需要時(shí)，使用蘇木素染液復(fù)染。

8) 切片經(jīng)過(guò)脫水，透明，封片。

注：若將本試劑應(yīng)用于自動(dòng)檢測(cè)平臺(tái)，需根據(jù)實(shí)際情況確認(rèn)使用條件。

【注意事項(xiàng)】

1.本免疫顯色試劑僅用于體外診斷，不作其他用途。

2.開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)仔細(xì)閱讀此說(shuō)明書。

3.請(qǐng)?jiān)谠噭┖杏行趦?nèi)使用。

4.本免疫顯色試劑僅限有專業(yè)經(jīng)驗(yàn)或經(jīng)專業(yè)培訓(xùn)的人員使用。

5.操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，并佩戴一次性手套。