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原位雜交(FISH三標(biāo)）
Tunel（白光）檢測200元/張
Tunel（熒光）檢測200元/張
IF Tunel 雙染250元/張
Tunel( 芯片）550元/張
原位雜交（DAB 顯色）240元/張
原位雜交（FISH 單標(biāo)）240元/張
原位雜交（FISH、IF 雙染）300元/張
原位雜交（FISH 雙標(biāo)）300元/張
原位雜交（FISH 三標(biāo)）350元/張
原位雜交（芯片）500 元起
探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、BIO）600元/條
探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、DIG）1000 元 / 條
探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、FAM）1100 元 / 條
探針設(shè)計(jì)合成（一端標(biāo)記、Cy3）1900 元 / 條
探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、BIO）1200 元 / 條
探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、DIG）1690 元 / 條
探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、FAM）1400 元 / 條
探針設(shè)計(jì)合成（兩端標(biāo)記、Cy3）2500 元 / 條
標(biāo)本要求：石蠟，冰切，細(xì)胞爬片
　　產(chǎn)品周期：5個(gè)工作日。
　　項(xiàng)目介紹：
　　1. 原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。
　　2. 所需器材：
　　脫水機(jī)G-JT12s，包埋機(jī)G-L5/p5,病理切片機(jī)RM2016，凍臺(tái)G-P1，烤箱GFL-70/230,組織攤片機(jī)G-KDP，載玻片及蓋玻片，正置熒光顯微鏡，成像系統(tǒng)，恒溫箱，高壓滅菌鍋，移液槍，鐘擺搖床。
　　3. 主要試劑：DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。DAPI?？篃晒獯銣绶馄瑒?。雜交液。
　　實(shí)驗(yàn)步驟：
　　細(xì)胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟
　　1、細(xì)胞爬片固定：細(xì)胞爬片置于4%多聚甲醛(DEPC)固定20min，于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。
　　2、消化：基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml)消化8min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。
　　3、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液37°恒溫箱1h。
　　4、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針1雜交液，37度雜交過夜。
　　5、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC 37°洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌
　　6、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針2雜交液，37度雜交過夜。
　　7、DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片劑封片。
　　8、鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光;FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光;CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光。)
　　細(xì)胞爬片熒光探針原位雜交雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判讀
　　DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽性表達(dá)為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的熒光。FAM(488)為綠光，cy3為紅光。mRNA原位雜交顯示結(jié)果理論為胞漿陽性，少數(shù)核陽性屬正常。micRNA與lncRNA不同指標(biāo)表達(dá)定位不同。根據(jù)表達(dá)量不同熒光亮度有強(qiáng)弱。

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