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流式-JC-1

流式-JC-1

  • 價(jià)格¥80
  • 單位
  • 貨號HKF6018
  • 品牌浩克

產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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服務(wù)介紹:

貨號名稱規(guī)格價(jià)格
HKF6018流式-JC-180
  一、實(shí)驗(yàn)簡介
  線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。JC-1是一種理想的用于檢測線粒體膜電位的熒光探針,可以檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。其原理是,當(dāng)線粒體膜電位較高時(shí),JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中,形成聚合物,488nm激發(fā)時(shí)的最大發(fā)射波長為590nm,可以產(chǎn)生紅色熒光,在流式上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽性;當(dāng)線粒體膜電位較低時(shí),JC-1不能聚集在線粒體基質(zhì)中,此時(shí)JC-1為單體,488nm激發(fā)時(shí)最大發(fā)射波長為527nm,可以產(chǎn)生綠色熒光,形成流式圖匯總所有細(xì)胞FL1為陽性。凋亡細(xì)胞則大多為FL1單陽性。不同熒光顏色的轉(zhuǎn)變反應(yīng)線粒體膜電位的變化,常用紅綠熒光的相對比例衡量線粒體去極化的比例。
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  二、流式JC-1實(shí)驗(yàn)步驟
  1、收集細(xì)胞:細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入離心管中,1000rpm離心5min收集細(xì)胞,棄上清。
  2、PBS洗滌細(xì)胞:加入3ml 4℃預(yù)冷的PBS完全重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min,棄上清。沉淀震蕩混勻。
  3、細(xì)胞計(jì)數(shù):移取10微升在血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀上進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù),調(diào)整細(xì)胞為0.5-1×10^6/ml。
  4、裝載探針:按照1:500用無血清培養(yǎng)基稀釋JC-1,使終濃度為10ug/mL。
  5、孵育探針:37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育20分鐘,每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細(xì)胞充分接觸,用無血清的培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞三次,以去除未進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的探針。
  6、上機(jī)檢測:流式細(xì)胞儀使用激發(fā)波長Ex=488nm,發(fā)射波長FL1(Em=525±20nm);FL2(Em=585±20 nm),用Flow Jo軟件分析結(jié)果。

暫無

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