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IF+TUNEL雙染

IF+TUNEL雙染

  • 價(jià)格¥200
  • 單位
  • 貨號(hào)HKF2039
  • 品牌浩克

產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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【產(chǎn)品信息】

石蠟切片熒光tunel+免疫熒光雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)步驟
1、?石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ12min-二甲苯Ⅱ12min-無水乙醇Ⅰ6min-95%酒精6min-85%酒精6min-蒸餾水洗(冬天脫蠟時(shí)間稍微延長)。
2、?修復(fù):組織切片置于盛滿EDTA修復(fù)液(PH8.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù),中火8min停火8min
中低火7min,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
3、?阻斷內(nèi)源性過氧化物酶:切片加上3%的雙氧水,室溫孵育25min,將玻片置PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
4、?血清封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈(防止抗體流走),在組化圈內(nèi)滴加3%BSA?均勻覆蓋組織,室溫封閉30min。
5、?加一抗:切片稍甩干后用在圈內(nèi)滴加按一定比例稀的抗體覆蓋組織。切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。
6、?加二抗:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織,避光室溫孵育50min。
7、?信號(hào)放大:將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min?。滴加相對(duì)應(yīng)顏色Flare信號(hào)放大試劑,3-5min.將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min?。
8、?修復(fù):組織切片置于盛滿EDTA修復(fù)液(PH8.0)的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù),中火8min?;?min中低火7min,此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā),切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。
9、?加試劑tunel工作液:按片子數(shù)量和組織大小取tunel試劑盒內(nèi)適量試劑TdT酶和反應(yīng)液試劑1:50混合,加到圈內(nèi)覆蓋組織,切片平放于濕盒內(nèi),37℃恒溫箱孵育1.5小時(shí),濕盒內(nèi)加少量水保持濕度。
10、DAPI復(fù)染細(xì)胞核:切片用PBS(PH7.4)洗滌3次,每次5min。去除PBS后在圈內(nèi)滴加DAPI染液,避光室溫孵育
10min。
11、封片:玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
12、 鏡檢拍照:切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。(紫外激發(fā)波長330-380nm,發(fā)射波長420nm;
FITC綠光激發(fā)波長465-495nm,發(fā)射波長515-555 nm;CY3紅光激發(fā)波長510-560,發(fā)射波長590nm)

產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號(hào)規(guī)格價(jià)格
IF+TUNEL雙染HKF2039200元



石蠟切片熒光tunel+免疫熒光雙標(biāo)結(jié)果判讀?DAPI
染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色,如試劑盒為488標(biāo)記,陽性凋亡細(xì)胞核為綠色,一抗標(biāo)記的陽性細(xì)胞為紅色
?

暫無

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