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原位雜交(DAB顯色)

原位雜交(DAB顯色)

  • 價(jià)格¥240
  • 規(guī)格
  • 貨號(hào)HKF5031
  • 品牌浩克

產(chǎn)品介紹
產(chǎn)品參數(shù)
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  項(xiàng)目介紹:

  1.原位雜交原理:原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交,從而對(duì)特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過(guò)程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

  2.所需器材:

  恒溫箱,高壓滅菌鍋,移液槍,鐘擺搖床。

  3.主要試劑:DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。蘇木素染液。中性樹膠。雜交液。HRP二抗。DAB顯色劑。

  實(shí)驗(yàn)步驟:

  石蠟切片DAB顯色原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟

  1、組織固定:組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

  2、脫水:組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟,包埋。

  3、切片:石蠟經(jīng)切片機(jī)切片,攤片機(jī)撈片,62°烤箱烤片2h。

  4、石蠟切片脫蠟至水:依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

  5、消化:根據(jù)組織固定時(shí)間長(zhǎng)短,切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘,自然冷卻。后基因筆畫圈,根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性,滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

  6、阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶:滴加3%甲醇-H2O2,室溫避光孵育15min,將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次,每次5min。

  7、預(yù)雜交:滴加預(yù)雜交液,37°C孵育1h。

  8、雜交:傾去預(yù)雜交液,滴加含探針雜交液, 濃度,恒溫箱度雜交過(guò)夜。

  9、雜交后洗滌:洗去雜交液,2×SSC,37°C 洗10min,1×SSC,37°C洗2×5min,0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多,可以增加甲酰胺洗滌。

  10、滴加封閉液:滴加封閉血清BSA 。室溫30min。

  11、滴加鼠抗地高辛標(biāo)記過(guò)氧化物酶(anti-DIG-HRP):傾去封閉液,滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育40min,后PBS洗4次×5min。

  12、DAB顯色:切片稍甩干后,在圈內(nèi)滴加新鮮配制的DAB顯色液,顯微鏡下控制顯色時(shí)間,陽(yáng)性為棕黃色,純水沖洗切片終止顯色。

  13:復(fù)染細(xì)胞核:Harris蘇木素復(fù)染3min左右,自來(lái)水洗,1%鹽酸酒精分化數(shù)秒,自來(lái)水洗,氨水返藍(lán),流水沖洗。

  14:脫水封片:將切片依次放入75%酒精6min-85%酒精6min—100%酒精I(xiàn) 6min—100%酒精I(xiàn)I 6min-正丁醇6min—二甲苯透明,將切片從二甲苯中拿出稍晾干后,中性樹膠封片。

  15、顯微鏡檢,圖像采集分析。

  結(jié)果判讀:陽(yáng)性為棕黃色,細(xì)胞核為藍(lán)色。

  注意事項(xiàng):mRNA為檢測(cè)對(duì)象時(shí),需嚴(yán)格要求實(shí)驗(yàn)環(huán)境經(jīng)無(wú)RNA酶處理。





產(chǎn)品名稱產(chǎn)品貨號(hào)產(chǎn)品規(guī)格價(jià)格
原位雜交(DAB顯色)HKF5031240元

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