原位雜交（芯片）

分子病理 原位雜交 實(shí)驗(yàn)服務(wù)

• 價(jià)格￥500
• 單位個(gè)
• 貨號(hào)HKF0024
• 品牌浩克

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項(xiàng)目介紹：

　　1.原位雜交原理：原位雜交是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸順序進(jìn)行精確定量定位的過程。原位雜交可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。

　　2.所需器材：

　　恒溫箱，高壓滅菌鍋，移液槍，鐘擺搖床。

　　3.主要試劑：DEPC。原位雜交固定液。PBS緩沖液。20×SSC洗脫液。蛋白酶K。蘇木素染液。中性樹膠。雜交液。HRP二抗。DAB顯色劑。

實(shí)驗(yàn)步驟：

　　石蠟切片DAB顯色原位雜交實(shí)驗(yàn)步驟

　　1、組織固定：組織取出洗凈后立即放入固定液(DEPC水配制)中固定2-12h。

　　2、脫水：組織固定完成后經(jīng)梯度酒精脫水后浸蠟，包埋。

　　3、切片：石蠟經(jīng)切片機(jī)切片，攤片機(jī)撈片，62°烤箱烤片2h。

　　4、石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-DEPC水洗。

　　5、消化：根據(jù)組織固定時(shí)間長短，切片于修復(fù)液中煮沸10-15分鐘，自然冷卻。后基因筆畫圈，根據(jù)不同組織不同指標(biāo)特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消化20-30 min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

　　6、阻斷內(nèi)源性過氧化物酶：滴加3%甲醇-H2O2，室溫避光孵育15min，將玻片置于PBS(PH7.4)中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

　　7、預(yù)雜交：滴加預(yù)雜交液，37°C孵育1h。

　　8、雜交：傾去預(yù)雜交液，滴加含探針雜交液, 恒溫箱 37度雜交過夜。

　　9、雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。

　　10、滴加封閉液：滴加封閉血清 BSA。室溫30min。

　　11、滴加鼠抗地高辛標(biāo)記過氧化物酶(anti-DIG-HRP)：傾去封閉液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育40min，后PBS洗4次×5min。